多管漩涡混合仪处理的鲎试剂为东方鲎的血液变形细胞溶解物_北京德世科技有限公司
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多管漩涡混合仪处理的鲎试剂为东方鲎的血液变形细胞溶解物

来源:原创 编辑:admin 时间:2016-08-29 07:47
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  0.2ml真空平底试管凝胶法鲎试剂使用说明书

  【产品标准号】GC

  【名称】凝胶法鲎试剂

  Gel Clot Tachypleus Amebocyte Lysate

  【用途】用于体外细菌内毒素的定性检测,禁止以任何途径进入机体。

  【原理】该鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品, 鲎试剂中含有C因子。B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度,pH值及无干扰物质),细菌内毒素启动C因子,引起一系列酶促反应,使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。

  【灵敏度】见外盒。

  【贮存】阴凉处,最佳2-8℃,避光。

  【有效期限】2年。

  【注意事项】

  ① 该试剂盒用于体外细菌内毒素的定性检测,严禁试剂以任何途径进入机体。

  ② 请选用与该批次鲎试剂相匹配的内毒素工作标准品。

  ③ 接触试剂及供试品的所有器皿必须是除热原的。试验过程应防止微生物的污染。

  该说明书中的除热原指内毒素浓度小于0.015 EU/ml。

  ④ 供试品的pH值应在6.0–8.0之间,若超出此范围,需用除热原的缓冲液、0.1M氢氧化钠或0.1M盐酸调节。

  ⑤ 当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时,须进行干扰试验,参见【供试品的干扰试验】。

  【用法】

  1. 材料和设备

  1.1试剂:内毒素工作标准品、鲎试剂、细菌内毒素检查用水。

  1.2 器材

  除热原试管、除热原吸头、除热原10×75mm玻璃反应试管或除热原2ml安瓿。

  多管旋涡混合器、移液器、试管架、恒温水浴箱或干热恒温仪(37±1℃)。

  2. 实验操作

  2.1细菌内毒素工作品的稀释

  取内毒素工作品1支,按《细菌内毒素工作品使用说明书》进行操作。

  2.2阴性对照

  即细菌内毒素检查用水。

  2.3阳性对照

  一般为浓度为2λ的内毒素标准溶液。

  2.4供试品阳性对照

  含2λ内毒素溶液的供试品。

  3. 检查操作

  3.1 试验加样

  从试剂盒内取出8支鲎试剂,开启,按下述方法设置检查项目及加样:

  检查项目反应管数每管加样

  阴性对照管20.2ml 细菌内毒素检查用水

  阳性对照管20.2ml阳性对照溶液

  供试品阳性对照管20.2ml供试品阳性对照液

  供试品管20.2ml供试品溶液

  3.2封闭管口,轻轻摇匀,垂直放入37℃的恒温器中温育60分钟,温育期间避免振动。

  4结果判断

  4.1将试管从恒温器中轻轻取出,缓慢倒转180°。若管内的内容物呈凝胶,不变形,不从管壁滑脱者为阳性,记录为(+);不呈凝胶或虽生成凝胶但从管壁滑脱者为阴性,记录为(-)。

  4.2只有当阴性对照管结果均为阴性,阳性对照管、供试品阳性对照管结果均为阳性,试验方有效,否则无效。

  若阴性对照管为阳性,提示鲎试剂、细菌内毒素检查用水、或实验器具受到污染。

  若阳性对照管为阴性,提示鲎试剂活性减失、内毒素效价降低,鲎试剂的灵敏度或内毒素的

  效价标示不准确,或内毒素的稀释不正确。

  若供试品阳性对照管为阴性,提示反应体系内有干扰因素存在。

  【鲎试剂灵敏度复核试验】

  详见《中华人民共和国药典》2015版中《细菌内毒素检查法》的“鲎试剂灵敏度复核试验”。

  当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时,应进行鲎试剂灵

  敏度复核试验。

  1.配制 2λ, λ, 0.5λ, 及0.25λ 的内毒素系列,每一浓度4个平行管,阴性对照2个平行管。进行凝胶试验,判定结果。

  2.结果计算(以λ = 0.25 EU/ml为例),见表。

  

  

  若鲎试剂灵敏度的测定值(几何均数G)在[0.5λ- 2λ],以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。

  【供试品的干扰试验】

  1.当对新药或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时,必须进行干扰试验;

  2.当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变,或试验环境中发生了任何有可能影响试 验结果的变化时,必须重新进行干扰试验。

  3.当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时,须进行干扰试验。

  实验步骤如下:

  ① 以供试品代替细菌内毒素检查用水为溶剂,配制 2λ, λ, 0.5λ,及0.25λ的内毒素系列,进行凝胶试验,判定计算结果。

  ② 若结果在 0.5λ 到2λ之间,则认为在此试验条件下供试品溶液不存在明显干扰作用。

  ③ 若结果在 0.5λ 到2λ之外,则认为在此试验条件下供试品溶液存在明显干扰作用,需对供试品进行系列稀释(稀释倍数不得超过最大有效稀释倍数MVD)或进行其它处理消除干扰。

  (参见《中华人民共和国药典》2015版中《细菌内毒素检查法》)



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